(セッション3:【分子細胞生物学からの展開】)「RNA サイレンシングの分子作用機序」塩見　美喜子（慶應義塾大学 ： RNA生物学）

rna sailencing at drosophila

  • miRNA: ~20~ small rna's, RNAi や他の機能

argo argonaute + small RNA -> risc complex

small RNA sequencing by next gen sequencer

  • 454, solexa, solid, heliscope

small rnaの機能(以下しばらく抜け多し)

  • animals
    • edogenus small infering rna
    • mirna
    • piRNA
  • in yeast argonaute
    • ago1
    • + endo-siRNA ->
  • in fry
    • ago1, 2, 3, piwi, aub
    • mirna, pirna, endo-siRNA -> silencing

mammal

  • miwi, mili, miwi2, ->
  • ago1, 2, 3, 5 -> miRNA

fry

  • ago1 2 mirna/endo-sirna; translation supresss, cleavaing, commom expression
  • ago3, piwi, aub -> 生殖特異的

piwi mutant vs wt phenotype

  • 卵巣精巣の形態形成がおかしい

piwi mutant 2

  • レトロトランスポゾンの発現上昇 in (?)

cell line(の確立)

  • 解剖してサンプリング
  • 細胞株の確立に成功

pi rna in cell line

  • pirnaの生合成経路は生きてる

pirnas in ovarian somas

  • ngsで配列決定
  • 基本的に通常細胞のpirnaと一緒

＊mapping

  • repeatからも発現
  • uniqにmapされるものを取ると

traffic jam gene

  • 3' utr から
  • え、cdsは?＞ある(westernで確認)
  • このlocusはmiRNAもタンパクも両方作ってる

tf(transctiptional factor, 転写因子)としての機能

  • 卵巣の中に含まれる体細胞で発現
  • piwiは卵巣で
  • パターンがことなるin murant

piwi-pirna(以下抜け)

モデル

  • 接着因子に対して働いている?

ここまでに含まれるテクノロジー

  • ngs
  • bioinfo
  • cloning, detetion method
  • rnai based screening
  • <- これらの技術が20年前に手に入ったら?; 多分、研究が進んでた訳ではない
    • これらの技術は基礎研究の上に成り立つ

in the future

  • silencing mechanisms
  • rna sequencing without amp
  • isolation of pri complexes, without noise
  • in the rna field
    • ncrna fuctional analysis
    • rna binding protein fuctions; rna helicases? rdrp?
  • no institute for rna biolog in japan

QA

  • 昨日から、複数のトピックにまたがる「揺らぎ」というトピックがあるのだけど、どう関係する?
  • pirnaの生合成のパスウェイに関わる事柄を追いたい
  • 特異性ってどうなってる、
  • 複合体の解析で分かるようになると
  • mrnaのms、なぜこのような(大きさなのか?)
  • 特異的な制御のためだと思われる; 大きくなると自分自身とくっついてしまうし、小さくなると特異性がなくなる
  • タンパクが活性中心
  • 核内のものには効きにくい